Los Kalanchoes, son Plantas medicinales que tienen muchas propiedades especiales. El objetivo de este estudio fue evaluar la actividad antimicrobiana del extracto acuoso de hojas de Kalanchoe en Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli y Candida albicans.
POTENCIAL ANTIMICROBIANO DEL EXTRACTO DE LAS HOJAS DE KALANCHOE
Seema V. Pattewar *, Deepak N. Patil y SB Dahikar
Instituto Sanjivani de Farmacia e Investigación, Kopargaon-423601, Maharashtra, India-
Se concluyó que el extracto metanólico presente al 60% muestra el mejor resultado. Estos extractos presentes en las hojas de las plantas se tomaron al azar para realizar distintas pruebas antimicrobianas.
La concentración más efectiva se determinó entonces comparando los resultados de la zona de inhibición. Se llevó a cabo un examen fitoquímico del 60% de extracto metanólico y se encontró una actividad inhibitoria mínima contra los microorganismos en la concentración mínima inhibitoria (CIM), la concentración bactericida mínima (CBM). La encuesta del estudio muestra que esta planta tiene solo actividad antibacteriana. Pero con esta investigación se concluye que las hojas de las plantas no solo tienen actividad antibacteriana sino también actividad antifúngica.
Las enfermedades de la piel están altamente correlacionadas con el medio cada vez más contaminado, la falta de higiene, el hacinamiento, la desnutrición, la falta de disponibilidad de agua potable, la alta temperatura y la humedad.
Además, los medicamentos utilizados para tratarlos son antibióticos, esteroides y sulfonamidas, que no solo están fuera del alcance de la población local en áreas remotas sino que también están asociados con efectos adversos como atrofia, telangiectasia, hirsutismo y dermatitis sensibilizante que son mucho más problemáticos.
Las plantas medicinales autóctonas han sido una fuente de drogas fácilmente disponible desde la antigüedad y aún hoy casi el 50% de las nuevas drogas han sido modeladas después de los fitoquímicos. La mayoría de la población en los países en desarrollo y aproximadamente el 25% de las personas en las regiones desarrolladas usan hierbas medicinales para la prevención y el tratamiento de enfermedades.
Reconociendo la importancia medicinal de las plantas autóctonas, la Organización Mundial de la Salud (OMS) en su guía de 1997 establece que "las plantas efectivas disponibles localmente se pueden usar como sustitutos de las drogas".
El trabajo de investigación sobre plantas medicinales y el intercambio de información obtenida recorrerán un largo camino en la exploración científica de las plantas medicinales en beneficio del hombre y es probable que disminuya la dependencia de las drogas importadas "
1 .En los últimos tiempos, ha habido aumentos en las cepas resistentes a los antibióticos de patógenos clínicamente importantes, que han llevado a la aparición de nuevas cepas bacterianas que son multirresistentes.
2 . Por lo tanto, existe la necesidad de buscar sustancias de otras fuentes con actividad antimicrobiana probada. En consecuencia, esto ha llevado a la búsqueda de agentes antimicrobianos más eficaces entre los materiales de origen vegetal, con el objetivo de descubrir ingredientes activos potencialmente útiles que puedan servir como fuente y plantilla para la síntesis de nuevos fármacos antimicrobianos 3, 4 .
Kalanchoe es rico en alcaloides, triterpenos, glucósidos, flavonoides, cardienólidos, esteroides, bufadienólidos y lípidos. Las hojas contienen un grupo de productos químicos llamados bufadienolides que son muy activos.
Bufadienolidas como la bryotoxina A, B, C, que son muy similares en estructura y actividad a otros dos glucósidos cardíacos, digoxina y digitoxina y poseen acciones antibacterianas, antitumorales, preventivas del cáncer e insecticidas
5 . La presencia de compuestos fenólicos, Triterpenoids (α-amyrin, β-amyrin) indica que la planta posee actividad antimicrobiana 6, 7, 8 .
Estos hallazgos respaldaron su uso en el tratamiento de la placenta y el ombligo del bebé recién nacido, que no solo cura rápidamente sino que también previene la formación de infecciones. Se descubrió que el extracto de hoja al 5% v / v es bactericida para un amplio espectro de bacterias gram-positivas y gramnegativas tales como B. subtilis, S. aureus, S. pyogenes, S. faecalis, E. coli ; Proteus spp; Klebsiella spp; Shigella spp; Salmonella spp; S. marcescens y P. aeruginosa, incluidos los aislados clínicos de estos organismos que poseen resistencia a múltiples antibióticos 5, 9 .
Preparación del extracto de Kalanchoe:
Extracto etanólico al 95% - Las hojas frescas se basaron groseramente y se extrajeron con etanol al 95% usando un equipo Soxhlet y después se concentraron por evaporación 10, 11 .
Extracto metanólico: Las hojas frescas se basaron groseramente y se maceraron con metanol durante no menos de 7 días en un recipiente cerrado y a continuación se concentraron por evaporación a temperatura ambiente 12, 13, 14, 15 .
Extracto metanólico al 60%: las hojas frescas se basaron groseramente y se maceraron con metanol al 60% durante no menos de 7 días en un recipiente cerrado y a continuación se concentraron por evaporación a temperatura ambiente 16, 17 .
Extracto acuoso: las hojas frescas se basaron groseramente y se maceraron con agua destilada durante no menos de 7 días en un recipiente cerrado y después se concentraron por evaporación a temperatura ambiente 16 .
Exploración fitoquímica: se realizaron exámenes fitoquímicos utilizando procedimientos estándar para presencia de alcaloides, glucósidos, carbohidratos, flavonoides, saponinas, esteroides, taninos, terpenoides y fenoles 18 .
Cultivos microbianos: Los cultivos bacterianos y fúngicos estándar se obtuvieron de IMTECH, Chandigarh, India y se usaron en el presente estudio ( Tabla 1 ). Los cultivos bacterianos se rejuvenecieron en caldo Mueller-Hinton (Hi-media laboratories, Mumbai, India) y el cultivo de hongos se rejuveneció en Sabouraud dextrosa a 37 o C durante 18 hy luego se almacenaron a 4 o C en Mueller-Hinton Agar y Sabouraud dextrose respectivamente . El tamaño del inóculo del cultivo bacteriano se estandarizó de acuerdo con el comité nacional de normas de laboratorio clínico. El cultivo bacteriano se inoculó en caldo nutriente estéril y se incubó a 37 oC durante 3 h hasta que el cultivo alcanzó una turbidez de 0,5 unidades de McFarland. Para los hongos, se inoculó un bucle de cultivo en 10 ml de caldo dextrosa estéril y se incubó a 370 ° C durante 3 h. La turbidez del cultivo se estandarizó a 10 5 CFU con la ayuda de SPC y turbidómetro.
El tamaño final de los inóculos se estandarizó a 10 5 CFU / ml con la ayuda de SPC y Nephlo-turbidometer.
CEPAS DE MICROORGANISMOS
Microorganismos Código MTCC
Staphylococcus aureus 96
Pseudomonas aeruginosa 424
Escherichia coli 739
Candida albicans 227
Método de difusión de pozos de agar: suspensión uniforme de 0,1 ml de 10 5 CFUml -1 se extendió uniformemente sobre la placa de agar Muller-Hinton para formar cultivos de césped. Para el método de difusión de pozos, se utilizó el punzón con un diámetro de 10 mm para preparar el pocillo en placa de agar. El pozo se llenó con 0,08 ml de diversos extractos y se evaluó la actividad antimicrobiana contra patógenos. Después de la incubación de 24 horas a 37 o la zona C de inhibición se midió en mm 19 . Para propiedades antifúngicas, 0.1 ml suspensión de hongos de 10 5 CFU ml -1se extendió uniformemente en la placa SDA para formar cultivos de césped. Se preparó el pozo (10 mm de diámetro) y se analizaron diversos extractos diluidos para determinar su actividad antimicrobiana contra patógenos fúngicos mediante la técnica de difusión de disco. Después de la incubación de 24 ha 37 ° C, la zona de inhibición del crecimiento se midió en mm.
Determinación de la concentración mínima inhibitoria (MIC): Para medir los valores de CIM, se analizaron diversas concentraciones de la población en comparación con las bacterias de prueba. La concentración mínima inhibitoria se definió como la concentración más baja capaz de inhibir el crecimiento de microorganismos.
Determinación de la Concentración Bactericida Mínima (MBC): Se mezclaron volúmenes iguales de las diversas concentraciones de cada extracto y caldo Mueller Hinton en micro-tubos para formar 0,5 ml de solución. Se añadieron 0,5 ml de suspensión de organismo a cada tubo. Los tubos se incubaron aeróbicamente a 37 ° C durante 24 h. Se mantuvieron dos tubos de control para cada lote de prueba. Estos incluyen extracto que contiene tubos sin inóculo y el tubo que contiene el medio de crecimiento y el inóculo. El MBC se determinó subcultivando la dilución de prueba en Agar Mueller Hinton y luego se incubó durante 24 h. La dilución más alta que no produjo una sola colonia bacteriana se tomó como Concentración bactericida mínima 20, 21 .
RESULTADOS Y DISCUSIÓN: La medicina herbaria representa uno de los campos más importantes de la medicina tradicional en todo el mundo. Para promover el uso adecuado de la medicina herbal y para determinar su potencial como fuentes de nuevos medicamentos, es esencial estudiar las plantas medicinales, que tienen una reputación de folclore de una manera más intensificada.
Exploración fitoquímica: el examen fitoquímico de los extractos indicó la presencia de alcaloides, glucósidos, carbohidratos, flavonoides, saponinas, esteroides, taninos, terpenoides y fenoles ( tabla 2 ).
EVALUACIÓN FITOQUÍMICA DE DIFERENTES EXTRACTOS
Prueba Extracto etanólico 95% Extracto metanólico 60% de extracto metanólico Extracto acuoso
Alcaloides + + + -
Glicósidos + + + +
Hidratos de carbono + + + +
Flavonoides + + + -
Saponinas + + + +
Esteroides + + + +
Taninos + + + +
Terpenoides - + + +
Fenoles + + + -
Clave: Presente (+), Ausente (-)
Actividad antimicrobiana: la actividad antimicrobiana de diversos extractos de hojas de Kalanchoe pinnata (Diámetro de la zona de inhibición en mm) fue como se muestra en la Tabla 3.
ACTIVIDAD ANTIMICROBIANA DE VARIOS EXTRACTO DE HOJAS DE KALANCHOE
Patógenos Extracto etanólico Extracto metanólico 60% de extracto metanólico Extracto acuoso
Staphylococcus aureus 15 21 21 18
Pseudomonas aeruginosa 18 21 21 18
Escherichia coli 18 25 27 20
Candida albicans 15 18 20 18
Entre los cuatro extractos anteriores, el 60% de extracto metanólico muestra un mejor resultado.
Staphylococcus aureus es una bacteria que es miembro de Firmicutes y se encuentra con frecuencia en el tracto respiratorio humano y en la piel. Aunque S. aureus no siempre es patógeno, es una causa común de infecciones de la piel (por ejemplo, forúnculos), enfermedades respiratorias (por ejemplo, sinusitis) e intoxicación alimentaria. Las cepas asociadas a la enfermedad a menudo promueven infecciones produciendo toxinas proteicas potentes y expresan proteínas de la superficie celular que se unen e inactivan los anticuerpos. Si estas bacterias pueden llegar al torrente sanguíneo y terminar en muchos sitios diferentes del cuerpo, causa infecciones de heridas, abscesos, osteomielitis, endocarditis, neumonía que puede dañar gravemente o matar a la persona infectada. Entonces, el extracto preparado puede actuar contra tales enfermedades, por lo tanto puede salvar la vida de una persona.
Por lo tanto, se descubrió MIC y MBC de 60% de extracto metanólico contra Staphylococcus aureus . Fue encontrado como 30 mg.
Los componentes fitoquímicos pueden proporcionar un incentivo para la evaluación del uso de la planta en medicina y en la agricultura. La encuesta de la literatura muestra que esta planta tiene solo actividad antibacteriana. Pero con esta investigación se concluye que las hojas de las plantas no solo tienen actividad antibacteriana sino también actividad antifúngica. Estos datos pueden ser útiles para la preparación de crema antibacteriana y antifúngica. Esto es muy útil para que el investigador explote más sobre esta valiosa planta.
AGRADECIMIENTO: Los autores agradecen a la dirección de Sanjivani Rural Education Society, Sanjivani Institute of Pharmacy and Research, Kopargaon por su valioso apoyo para este proyecto.
